期刊简介
中华医学会主办，重庆医科大学第二临床学院病毒性肝炎研究所承办。本刊是全国性学术期刊，反映了肝脏疾病基础研究和临床实践的最新水平，报道了国内最新研究成果,介绍了国际学术动态,促进国际国内学术交流。内容包括肝脏疾病的病原学、流行病学、病理、病理生理、免疫学、发病机理、 临床诊断治疗及预防的实践经验和研究成果,以及新技术、新方法的重要进展。杂志适合县级以上医疗卫生机构从事肝病防治研究及临床实践的医务人员、预防和基础科研工作者阅读。
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首页>中华肝脏病杂志
- 杂志名称：中华肝脏病杂志
- 主管单位：中国科学技术协会
- 主办单位：中华医学会
- 国际刊号：1007-3418
- 国内刊号：50-1113/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：中国期刊全文数据库(CJFD)期刊收录：CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 万方收录(中), 上海图书馆馆藏, JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), 国家图书馆馆藏, 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中), 知网收录(中), 文摘与引文数据库, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), CA 化学文摘(美)
HBsAg及B7-1双表达逆转录病毒载体的构建及其在真核细胞中表达
周智；姚集鲁；张海红；卢建溪；陈文思
关键词：乙型肝炎表面抗原, 共刺激分子, 逆转录病毒载体
摘要：目的为探索共刺激分子B7-1增强HBsAg真核表达载体基因免疫的效果，并用于消除乙型肝炎免疫耐受。方法用高保真PCR法扩增目的基因片段B7-1及带接头和启动子的IRES-HBs基因片段，亚克隆到pBluescriptks+载体中测序，再克隆到逆转录病毒载体plxsn中。用脂质体转染PA317细胞，经G418筛选获得抗性克隆。用NIH3T3检测假病毒颗粒的滴度，并用于感染HepG2、293、NIH3T3细胞系，以RT-PCR检测B7-1的转录，免疫组织化学检测B7-1表达，ELISA检测细胞上清液中HBsAg表达。结果所扩增的目的基因片段经测序证实，未发现序列有改变。用内切酶EcoRⅠ/XhoⅠ将B7-1插入plxsn中，然后用XhoⅠ/BamHⅠ将IRES-HBs插入构建成plxsn-B7-1-HBs。转染后PA317 24h，按1:10传代，2周后共得43个克隆，1:5传代得90个克隆，假病毒颗粒滴度平均为5.4×105cfu/ml。B7-1在上述细胞中均有表达。HBsAg 在PA317、NIH3T3、HepG2、293细胞上清液中的含量(A值)24、48、72h分别为0.15、0.11、0.20、0.13；0.63、0.47、0.76、0.58；0.77、0.61、0.89、0.69。结论成功构建了共表达HBsAg及B7-1抗原的重组逆转录病毒载体，在体外真核细胞中目的抗原均有表达。可进一步行基因免疫，研究B7-1对HBsAg免疫反应的影响，并用于防治乙型肝炎的研究。
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