期刊简介
中华医学会主办，重庆医科大学第二临床学院病毒性肝炎研究所承办。本刊是全国性学术期刊，反映了肝脏疾病基础研究和临床实践的最新水平，报道了国内最新研究成果,介绍了国际学术动态,促进国际国内学术交流。内容包括肝脏疾病的病原学、流行病学、病理、病理生理、免疫学、发病机理、 临床诊断治疗及预防的实践经验和研究成果,以及新技术、新方法的重要进展。杂志适合县级以上医疗卫生机构从事肝病防治研究及临床实践的医务人员、预防和基础科研工作者阅读。
往期目录
-
2000
-
2001
-
2002
-
2003
-
2004
-
2005
-
2006
-
2007
-
2008
-
2009
-
2010
-
2011
-
2012
-
2013
-
2014
-
2015
-
2016
-
2017
-
2018
-
2019
首页>中华肝脏病杂志
- 杂志名称：中华肝脏病杂志
- 主管单位：中国科学技术协会
- 主办单位：中华医学会
- 国际刊号：1007-3418
- 国内刊号：50-1113/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：中国期刊全文数据库(CJFD)期刊收录：CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 万方收录(中), 上海图书馆馆藏, JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), 国家图书馆馆藏, 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中), 知网收录(中), 文摘与引文数据库, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), CA 化学文摘(美)
乙型肝炎DNA疫苗系列质粒的构建及其在SP2/0细胞中的表达
秦山；唐红；赵连三；林勇
关键词：乙型肝炎病毒, 疫苗, 重组质粒, 构建, 基因片段, 转染细胞, 蛋白, 插入片段, 转化大肠杆菌, 启动子, 扩增, 鉴定, 核酸, 分析仪测定, 质粒转染, 治疗作用, 载体, 引物, 阳性克隆, 下游
摘要：近年来兴起的核酸疫苗对某些病毒感染同时具有预防和治疗作用。我们构建了一系列能表达乙型肝炎病毒大、中、小蛋白的疫苗质粒，并研究了其在SP2/0细胞中的表达情况。一、材料与方法1. S、MS、LS蛋白编码基因片段的获取：以含有adr亚型HBV全基因组pBHB4质粒为模板，用3对人工合成的引物SF/SR、S2F/SR、S1F/SR分别扩增编码小蛋白S（nt28-708）、中蛋白MS（nt3077-708）和大蛋白LS（nt2719-708）的DNA片段。引物SF、S2F和S1F分别互补于S、前S2和前S1基因起始区域，SR则互补于S基因相应的终止区。2. S1S重组基因片段的获取：采用重叠扩增PCR法对S1S2S基因进行剪切和重组，即获得不含S2的S1S重组基因片段。3. 重组质粒的构建及鉴定：将上述获得的S、S1S、S2S及S1S2S基因片段分别插入质粒pSG5UTPL/Flag载体的SV40启动子下游和质粒pRc/CMV载体的CMV启动子下游。将以上8个重组质粒转化大肠杆菌XL Blue 1，经菌落PCR鉴定技术筛选含相应插入片段的阳性克隆，然后抽提、扩增、纯化并酶切鉴定，以373A型核酸自动分析仪测定所插入片段的核酸序列。4. 重组质粒在SP2/0细胞中的表达：将纯化的质粒转染SP2/0细胞并筛选、建立长期转染细胞株。分别收集部分转染细胞，超声破碎后收集上清液，以Western-Blot检测相应蛋白质在SP2/0细胞中的表达情况。
友情链接