慢性丙型肝炎患者外周血单个核细胞内HCV复制与干扰素治疗反应

摘要：一、资料与方法1. 病例选择和治疗：活动性慢性丙型肝炎患者21例，抗HCV和HCV RNA均阳性，ALT异常（＞80U/L)，病程持续6个月以上。HBV标记均阴性，并排除其他因素，如酒精、遗传和自身免疫等因素引起的肝病。根据临床和肝组织学，除2例为伴早期肝硬化外，其余均为活动性慢性肝炎。所有患者均接受IFN-α2a治疗，每天300万单位，连续15d，后每周3次，每次300万单位，共16周。2. 患者PBMC的分离和检测：分别抽取新鲜肝素抗凝全血3～5ml，用淋巴细胞分离液分离PBMC。用作逆转录聚合酶链反应技术（RT-PCR）检测的PBMC，以蛋白酶和RNA酶分别处理，以排除血清中HCV对PBMC的污染可能。所有患者分离的PBMC均以SP免疫组织化学、RT-PCR和常规透射电镜方法分别检测HCVAg、HCV RNA和细胞内HCV颗粒。SP免疫组织化学通用型试剂盒为美国Zymed公司产品，购自北京中山生物技术公司。检测HCV RNA的RT-PCR试剂盒，购自北京京师生物技术公司。HCVAg和HCV RNA检测按试剂盒说明书步骤进行。常规透射电镜标本按常规方法制备，1μm切片定位后超薄切片，铀铅双染色后JEM-1200EX透射电镜观察和照相。3. 疗效分析：主要根据治疗前后患者血清ALT和HCV RNA变化，PBMC内HCV RNA和HCVAg改变情况，并参考临床表现，将IFN治疗后患者归为三组，完全应答组:血清ALT降至正常值,HCV RNA转阴，PBMC内HCVAg阳性强度明显减弱，临床症状消失或明显改善；部分应答组：血清ALT复常或明显降低，但血清和PBMC内HCV RNA基本无变化，PBMC内HCVAg阳性强度变弱或无变化，临床症状改善或无变化；无应答组：血清ALT和HCV RNA，PBMC中HCV RNA和HCVAg基本无变化，临床症状基本无改变。二、结果完全应答者7例（33.33%），部分应答者5例（23.81%），无应答者9例（42.85%）。检查结果显示，完全应答组患者，血清ALT降至正常，血清HCV RNA转阴，PBMC内HCV RNA无改变，原5例阳性者仍为阳性，HCVAg２例转阴，其余5例阳性强度减弱，电镜观察该组患者PBMC，治疗前5例均可见到过去我们以电镜和免疫电镜证实的HCV颗粒，治疗后可见者仅2例，光镜下PBMC-HCVAg呈“++”以上阳性者，一般电镜下易见HCV颗粒,该组患者临床症状消失或显著改善。部分应答患者5例，治疗后1例血清ALT复常，4例明显下降，血清HCV RNA 1例转阴，其余4例无改变，PBMC HCV RNA治疗前后无变化，HCVAg治疗前３例阳性者，治疗后阳性强度稍有减弱或无变化，治疗前2例HCVAg原阴性者，治疗后无变化，临床症状改善或无变化。无应答患者9例，治疗前后血清ALT和HCV RNA，PBMC内HCV RNA基本无变化。PBMC内HCVAg阳性程度稍有减弱或无改变。电镜观察治疗前8例可见HCV颗粒，治疗后可见者4例。该组患者临床症状无改善或稍有加重。三、讨论结果表明，IFN对活动性慢性丙型肝炎患者血清和PBMC内HCV表达有直接作用，这一作用与其治疗应答有关。IFN治疗完全应答者、部分应答者或无应答者的PBMC内HCVAg表达均受到不同程度抑制，特别是完全应答组患者更为明显，但PBMC内HCV RNA治疗前后均无变化，表明IFN对慢性丙型肝炎患者PBMC内HCV抗原合成有一定抑制作用，但不能清除PBMC内HCV RNA。因此，在IFN治疗慢性丙型肝炎时，设法清除患者PBMC内HCV RNA比清除血清和肝细胞内HCV RNA可能更为重要和更有价值。