期刊简介
中华医学会主办，重庆医科大学第二临床学院病毒性肝炎研究所承办。本刊是全国性学术期刊，反映了肝脏疾病基础研究和临床实践的最新水平，报道了国内最新研究成果,介绍了国际学术动态,促进国际国内学术交流。内容包括肝脏疾病的病原学、流行病学、病理、病理生理、免疫学、发病机理、 临床诊断治疗及预防的实践经验和研究成果,以及新技术、新方法的重要进展。杂志适合县级以上医疗卫生机构从事肝病防治研究及临床实践的医务人员、预防和基础科研工作者阅读。
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首页>中华肝脏病杂志
- 杂志名称：中华肝脏病杂志
- 主管单位：中国科学技术协会
- 主办单位：中华医学会
- 国际刊号：1007-3418
- 国内刊号：50-1113/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：中国期刊全文数据库(CJFD)期刊收录：CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 万方收录(中), 上海图书馆馆藏, JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), 国家图书馆馆藏, 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中), 知网收录(中), 文摘与引文数据库, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), CA 化学文摘(美)
成人原代肝细胞微囊化冷冻
杭化莲；禹亚彬；卞建民；夏强
关键词：肝细胞, 细胞培养技术, 冷冻, 微囊化
摘要：目的 建立一种稳定的成人肝细胞冷冻方法,为构建永生化肝细胞系提供充足的肝细胞来源,为肝细胞移植、生物人工肝支持系统治疗急、慢性肝病及肝细胞体外应用模型提供潜在的肝细胞资源.方法 20例供肝采用离体两步胶原酶灌注技术分离成人原代肝细胞.选择7个预置时间点(2、6、12、24、36、48、72 h),在4℃人无血清培养基预置12 ～ 24 h后,使用海藻酸钠-多聚赖氨酸微球微囊化肝细胞,液氮保存.分析预置微囊冷冻组及对照组肝细胞的形态学、病理结构、白蛋白水平、尿素合成、细胞周期、肝细胞特异性功能基因mRNA和蛋白表达水平.各组间数据比较均采用方差分析,计数资料采用Fisher 's exact test检验.结果 在部分肝叶切除后使用离体两步胶原酶灌流技术分离所得肝细胞活率和贴壁率分别是75.0％±4.6％和72.0％±6.0％.4℃预置12h或24h细胞的白蛋白分泌高于其他时间点,F=40.3,P值均＜0.05,差异有统计学意义.4℃预置12h或24h与立即冷冻(IC)组比较,解冻后贴壁肝细胞白蛋白和尿素合成水平明显增高,且肝细胞特异性功能基因mRNA和蛋白水平明显增高,此两个时间点是适预置时间.预置微囊冷冻(PMC)组细胞与IC组比较,肝细胞形态保持的更为完整,细胞增殖周期、糖原染色及肝细胞功能特异性基因的mRNA和蛋白表达水平均明显增强.PMC组细胞在贴壁培养后第2、3、4天的白蛋白分泌分别与直接培养(DC)组分别比较,P值均＞ 0.05,差异均无统计学意义;而PMC组细胞在贴壁培养后第2、3、4天,与IC组的白蛋白水平比较(119.2 ng/ml对比101.2 ng/ml,110.0 ng/ml对比87.6 ng/ml,98.2 ng/ml对比73.8 ng/ml)和尿素合成比较(7.83μg/ml对比6.79 μ g/ml,6.83 μ g/ml对比5.89μg/ml,5.85 μg/ml对比4.83 μg/ml)均较IC组明显增高,两组比较,F值分别为22.1、31.1,P值均＜0.05,差异均有统计学意义.结论 部分肝叶切除后使用离体两步胶原酶灌注技术提供了一种创新、简单、可靠的肝细胞分离技术,人肝细胞在微囊化冷冻前4℃预置12 ～ 24h可更好地恢复形态和功能的完整性,为药理毒理学、生物人工肝以及细胞治疗的临床应用提供可能.
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