期刊简介
中华医学会主办，重庆医科大学第二临床学院病毒性肝炎研究所承办。本刊是全国性学术期刊，反映了肝脏疾病基础研究和临床实践的最新水平，报道了国内最新研究成果,介绍了国际学术动态,促进国际国内学术交流。内容包括肝脏疾病的病原学、流行病学、病理、病理生理、免疫学、发病机理、 临床诊断治疗及预防的实践经验和研究成果,以及新技术、新方法的重要进展。杂志适合县级以上医疗卫生机构从事肝病防治研究及临床实践的医务人员、预防和基础科研工作者阅读。
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首页>中华肝脏病杂志
- 杂志名称：中华肝脏病杂志
- 主管单位：中国科学技术协会
- 主办单位：中华医学会
- 国际刊号：1007-3418
- 国内刊号：50-1113/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：中国期刊全文数据库(CJFD)期刊收录：CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 万方收录(中), 上海图书馆馆藏, JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), 国家图书馆馆藏, 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中), 知网收录(中), 文摘与引文数据库, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), CA 化学文摘(美)
四环素调控表达肿瘤坏死因子α抗乙型肝炎病毒的实验研究
倪艳；蒋凤；徐华；曾腾；雷宇；陈压西；周智；任红
关键词：肝炎病毒, 乙型, 细胞因子, 调控表达, 抑制作用
摘要：目的 研究四环素调控表达的肿瘤坏死因子α (TNFα)抑制HBV复制的作用. 方法 以pcDNA4TM/四环素操纵子序列(TO)载体为模板,用PCR法扩增含四环素调控表达序列片段TO,插入pUC118载体中测序,选择测序正确的序列取代pVITRO3载体中相应的片段,构建成pVITRO3-TO.用相同的方法以pcDNA6/四环素阻遏蛋白(TR)(C)载体为模板扩增TR基因,经测序证实后插入pVITRO3-TO载体的一个多克隆位点,构建成pVITRO3-TO-TR.在另一个多克隆位点插入TNF α 基因,构建pVITRO3-TO-TR-TNF α .将重组质粒瞬时转染HepG2细胞,研究四环素调控表达TNF α 的有效性.以HepG2.2.15细胞为HBV复制模型,转染pVITRO3-TO-TR-TNF α 后,经潮霉素抗性筛选及有限稀释,选择高效表达TNF α 的细胞建立细胞系,观察经四环素调控表达后,TNF α 抑制HBV复制的作用.多组间数据比较使用方差分析. 结果 经过改建的双表达载体能够有效表达TNF α,并可以用不同剂量的四环素进行调控,四环素的佳工作浓度为1.0μ g/ml.诱导1、3、5d后,转染pVITRO3-TOTR-TNF α 组上清液中的HBsAg抑制率分别为14.8％、11.5％、28.44％,转染pVITRO3-TOTR组分别为1.2％、1.1％、0,诱导5d后的HBsAg抑制率差异有统计学意义(F=13.65,P＜0.05);转染pVITRO3-TOTR-TNF α 组的HBeAg的抑制率分别为50％、26.67％、47.85％,转染pVITRO3-TOTR组分别为0.3％、1.3％、0,诱导1、3、5d时的HBeAg抑制率差异均有统计学意义(F值分别为27.31、14.06和43.76,P值均＜0.05).荧光定量PCR结果显示,诱导5d后,TNF α 对细胞内和培养上清液的HBV DNA有明显的抑制作用,抑制率分别为70.26％和79.86％,与对照组相比,差异均有统计学意义(F值分别为96.7和62.72,P＜0.05).进一步的研究结果表明,TNF α对HBV S基因的mRNA转录有明显抑制作用.结论 成功构建了四环素调控表达的TNF α 载体,瞬时和稳定转染细胞后均能有效表达.在细胞模型中对HBV DNA的抑制作用好,其次是对HBeAg的抑制,对HBsAg的抑制作用弱.TNF α对病毒转录水平的抑制可能是其发挥抗HBV作用的一个重要环节.
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