期刊简介
中华医学会主办，重庆医科大学第二临床学院病毒性肝炎研究所承办。本刊是全国性学术期刊，反映了肝脏疾病基础研究和临床实践的最新水平，报道了国内最新研究成果,介绍了国际学术动态,促进国际国内学术交流。内容包括肝脏疾病的病原学、流行病学、病理、病理生理、免疫学、发病机理、 临床诊断治疗及预防的实践经验和研究成果,以及新技术、新方法的重要进展。杂志适合县级以上医疗卫生机构从事肝病防治研究及临床实践的医务人员、预防和基础科研工作者阅读。
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首页>中华肝脏病杂志
- 杂志名称：中华肝脏病杂志
- 主管单位：中国科学技术协会
- 主办单位：中华医学会
- 国际刊号：1007-3418
- 国内刊号：50-1113/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：中国期刊全文数据库(CJFD)期刊收录：CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 万方收录(中), 上海图书馆馆藏, JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), 国家图书馆馆藏, 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中), 知网收录(中), 文摘与引文数据库, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), CA 化学文摘(美)
乙型肝炎病毒Ⅹ蛋白对肝癌细胞细胞色素P450 2E1表达的调控及其作用机制
谢斌；吴刚；陈平；刘坤；袁涛
关键词：细胞色素P450, 癌, 肝细胞, 信号通路, 肝细胞核因子4α, 胆固醇调控元件结合蛋白-1, 乙型肝炎病毒Ⅹ蛋白
摘要：目的 探讨乙型肝炎病毒Ⅹ蛋白(HBx)抑制细胞色素P450 2E1 (CYP2E1)表达的作用机制及其对肝细胞癌转移的影响.方法 将CYP2E1启动子区域划分为10个不同长度的片段并分别克隆到质粒PGL3-Basic上,与HBx表达载体(pCMV-2B-FLAG-Ⅹ)共转染于HepG2细胞中测定荧光素酶活性以确定HBx作用区域.凝胶电泳迁移率试验分析转录因子与DNA的结合；CCK-8检测细胞的增殖；细胞的侵袭测定采用Martrigel试验.增殖试验、侵袭试验数据比较用t检验；荧光素酶活性数据比较采用方差分析.结果 通过对CYP2E1启动子的缺失分析,重组子P8(删除-483 ～-274bp后的P7部分)活性与P7比较明显增高,达216.69％(F=142.13,P=0.002),确定HBx作用区域位于P7 (-483 ～-274 bp),进而通过MatInspector分析该区域存有肝细胞核因子4α (HNF4α)与胆固醇调节元件结合蛋白-1(SREBP-1)两转录因子结合位点并对该两序列进行突变分析,将mut-HNF4 α、mut-SREBP-1及mut-Duel重组质粒与或不与pCMV-2BFLAG-Ⅹ蛋白表达载体转染HepG2细胞,测定荧光素酶活性,分别为8.6％、24.44％、147.24％,进一步证实转录因子HNF4 α与SREBP-1参与HBx对CYP2E1的调控(F=112.24,P=0.001);凝胶电泳迁移率试验结果显示转录因子HNF4 α与SREBP-1是通过与CYP2E1启动子的结合而发挥作用；CCK-8结果显示转染pCMV-2B-FLAG-Ⅹ蛋白的HepG2细胞的增殖吸光度值A为0.86±0.11,未转染组增殖吸光度值A为0.73±0.09,两组比较,差异有统计学意义(t=5.62,P=0.031); HepG2细胞的侵袭能力也强于对照组,穿膜细胞数为(40.0±8.1)个,显著高于对照组穿膜细胞数(18.0±3.o)个(t=21.54,P=0.001);加入PI3K与JNK信号通路抑制剂Wortmannin、SP600125后可抑制HBx对CYP2E1mRNA与蛋白水平表达的促进作用及对细胞增殖、侵袭的促进作用,提示PI3K与JNK信号通路参与该调控.结论 HBx可能通过PI3K与JNK信号通路激活转录因子HNF4 α与SREBP-1,然后作用于CYP2E1启动子抑制CYP2E1的表达,进而促进肝癌的生长与侵袭.
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